Was ist die gangigste Methode zur Einfuhrung Recombinant DNA auf Bakterien?

Rekombinante DNA ist eine vom Menschen verursachten genetischen Code, der Gene eines Organismus mit einem Vektor zusammengefuhrt und in einem anderen Organismus, in der Regel Bakterien eingefugt beinhaltet. Diese genetische Linie ist in der Regel etwas, das nie in der Natur auftreten wurde. Als eine Form der genetischen Veranderung wird es verwendet, um die spezifischen Ma?nahmen von Proteinen erstellt von das Gen zu identifizieren. Es kann auch sein vorteilhaft in der Studie von genetisch bedingten Erkrankungen oder die Schaffung von Organismen, die bestimmte Vorteile uber ihre naturliche Struktur, z. B. genetisch veranderte Lebensmittel haben.

Der Prozess wurde in den fruhen 1970er Jahren an der Stanford University, nach der Entdeckung von Plasmiden, dem Vektor in die meisten Rekombinante DNA Verfahren verwendet. Was ist die gangigste Methode Rekombinante DNA Bakterien vorstellen?

Gen Isolation

Isolation des gewunschten Gens ist der erste Teil der Erstellung von rekombinanten DNA. Wissenschaftler mussen bestimmen, was sie mit dem gen zu erreichen mochten und wie sie die Ergebnisse verfolgen werden. Je nach der Studie werden verschiedene Gene, die spezifische Proteine erstellen konnen ausgewahlt. Dies hilft Genetiker analysieren Sie die Verwendung des Gens als auch als moglicherweise eine andere Funktion innerhalb der gewahlten Bakterien erstellen.

Mit einem Beschrankungsenzym, ist das gewunschte gen fur die Herstellung eines bestimmten Proteins im Organismus verantwortlich getrennt von den verbliebenen Chromosomen. Beschrankungs-Enzymen sind naturlich vorkommenden Materialien aus Bakterien und Archaeen, einzellige Mikroorganismen ohne Zellkern oder Organellen gekeult. Wenn diese Enzyme, die DNA eingefuhrt werden, konnen sie den Rest der Struktur eine Nukleotidsequenz trennen. Im Wesentlichen dadurch Einschnitte in jeder Strang von DNA Doppelhelix, damit das Zucker-Phosphat Material ist schneiden, das Gen fur den rekombinante Prozess freigeben.

Vorbereitung des Ziels DNA

Bevor das Gen aus dem Organismus in ein empfanglich Thema wie Bakterien eingefugt werden kann, mussen bestimmte Prozesse ausgefuhrt werden. Ein Teil der Bakterien DNA wird entfernt. Das nennt man eine Plasmid, eine kreisformige, Double-Stranded Molekul in der DNA, die unabhangig von der genomic DNA, replizieren kann gemeinhin als chromosomaler DNA. Der Beschrankungsenzyme wieder zu verwenden, ist ein Teil des Plasmids entfernt und ersetzt mit dem gewunschten gen. Dieses Gen ist vor weiter Schneiden mit Methylierung, das Hinzufugen eines Molekuls hydrophobe Alkyl Lage Abwehr das Beschrankungsenzym geschutzt. Eine Fusion Enzym muss verwendet werden, um das neue Gen mit der Plasmid zu verknupfen.

Einfugen der DNA in die Bakterien

Die letzte Proze? in was die gangigste Methode ist, Bakterien Rekombinante DNA vorzustellen ist das Einfugen des Plasmids in der Mikroorganismus. Dies kann erreicht werden, mit einer der zwei Methoden: chemische oder elektrische. Die Bakterien und der Plasmid Vektor werden zusammen mit einer Losung wie Kalzium-Chlorid platziert. Durch die Anpassung der Temperatur, in der Regel Senkung es in der Nahe von Einfrieren, macht es die Bakterien mehr empfanglich fur die Absorption des Vektors. Die andere Moglichkeit, die ein Plasmids in die Bakterien eingefugt werden kann, ist durch Electroporation. Dies ist wesentlich zuverlassiger und kann durch die Genetiker effizienter gesteuert werden. Durch die Anwendung eines kleinen Puls der Elektrizitat, macht es die Bakterien Absorption durch die Poren anfallig.

Referenzen

"Bakterielle Transformation" Plattsburgh State University of New York: http://faculty.plattsburgh.edu/donald.slish/Transformation.html

"Die Grundlagen der Recombinant DNA" Rensselaer Polytechnic Institute:http://www.rpi.edu/dept/chem-eng/Biotech-Environ/Projects00/rdna/rdna.html

Bild-Quelle

Rekombinante Bildung von Plasmiden. (Auskunfte Minestrone-Suppe auf Wikimedia Commons; GNU Freie Dokumentationslizenz; http://Upload.wikimedia.org/Wikipedia/en/0/01/Recombinant_formation_of_plasmids.SVG)

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